Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System - Инструкция (Страница 12)

Pу
сский
Стр. 12 из 25
Pу
сский
Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System Инструкции по эксплуатации TA9145 RU-CE-Rev_E 18/06/2013
Порядок скрининга предметных стекол
Скрининг предметных стекол должен выполняться в следующем порядке:
1. Контрольное предметное стекло HER2 – HER2 Primary Antibody
Валидированный анализ с контрольным предметным стеклом Oracle HER2 показывает
следующее:
• Наличие интенсивного коричневого полного окрашивания мембраны в контрольной
колонии клеток SK-BR-3 3+.
• Наличие умеренного коричневого полного окрашивания мембраны в контрольной
колонии клеток MDA-MB-453 2+.
• Наличие едва заметного коричневого неполного окрашивания мембраны в
контрольной колонии клеток MDA-MB-175 1+.
• Никакого окрашивания в контрольной колонии клеток 0 MDA-MB-231.
Важное замечание: Особенностью контрольной колонии клеток MDA-MB-175 1+ является
отчетливый рисунок роста, в котором клетки образуют кластеры. В таком клеточном
кластере образуется непрерывная люминальная щеточная пограничная область. Это
щеточная пограничная область будет окрашена сильнее, чем вся остальная мембрана
клетки. Правильным для онкогенного белка HER2 1+ будет слабое, едва различимое
окрашивание клеточной мембраны. В этой колонии клеток может также наблюдаться
точечное иммуноокрашивание области Гольджи в цитоплазме.
2. Внутрилабораторная позитивная контроль-ткань – HER2 Primary Antibody
НАЛИЧИЕ коричневого окрашивания мембран должно наблюдаться соответственно
известному состоянию онкогенного белка HER2 выбранного позитивного контроля.
3. Внутрилабораторная негативная контроль-ткань – HER2 Positive
Control
Должно наблюдаться ОТСУТСТВИЕ окрашивания мембран. Компонент негативной
контроль-ткани подтверждает недостаточность перекрестной реактивности системы
обнаружения по отношению к целевым клеткам / клеточным компонентам. Если
окрашивание мембраны происходит в компоненте негативной контроль-ткани, то
результаты, полученные с образцами пациента не получают валидацию.
4. Ткань пациента – окрашенная с использованием HER2 Negative Control
ОТСУТСТВИЕ окрашивания мембран подтверждает специфическую маркировку
целевого антигена первичным антителом. Другое коричневое окрашивание в цитоплазме
образца, обработанного HER2 Negative Control, например, в соединительной ткани,
лейкоцитах, эритроцитах или омертвевшей ткани, следует считать неспецифическим
фоновым окрашиванием и регистрировать.
5. Ткань пациента – окрашенная с использованием HER2 Primary Antibody
HER2 выраженность онкогенного белка определяется критерием, заданным в Таблице 4
и в Руководстве по интерпретации результатов Bond Oracle HER2 IHC System.
Ограничения
A. Общие ограничения
Иммуногистохимия – это лабораторная многоступенчатая технология для
интерпретации и определения гистопатологических характеристик. Это технология,
требующая специального обучения по всем аспектам процедуры (включая выбор
реактивов, ткани, фиксацию, обработку и иммуногистохимическую подготовку
предметных стекол) и интерпретации результатов.
Иммуногистохимическое окрашивание ткани зависит от фиксации и обработки
ткани перед окрашиванием. Неправильная фиксация, замораживание, оттаивание,