Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Инструкция (Страница 8)

Pу
сский
Стр. 8 из 24
Pу
сский
Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию TA9217 RU-CE-Rev_D 11/11/2013
7. У нового комплекта Leica HER2 FISH System - 30 Test просканируйте штрихкод
лотка с реактивами ручным сканером, чтобы войти в каталог реактивов Leica
BOND (только один штрихкод).
8. Подготовьте Leica BOND Enzyme 5 в прилагаемой открытой емкости Leica BOND
с разбавлением 1:300. Например, для 10 предметных стекол налейте 10 µl
Leica BOND Enzyme Concentrate 2 на 2990 µl Leica BOND Enzyme Diluent.
9. Просканируйте прилагаемую открытую емкость Leica BOND и зарегистрируйте как
Bond Enzyme 5 .
10. Перейдите в окно настроек предметного стекла и щелкните на Add case (Добавить
пациента) .
11. Введите данные для первого пациента. Убедитесь, что объем раздачи установлен
на 150 µL, а протокол подготовки – на *Dewax (Депарафинизация). Щелкните на OK.
12. Когда пациент выделится в окне настроек предметного стекла, щелкните Add slide
(Добавить предметное стекло) .
13. Сначала добавьте исследуемые предметные стекла пациента. Убедитесь, что тип
ткани установлен на Test tissue (Исследуемая ткань).
14. Выберите режим окрашивания Single (Одиночный).
15. Выберите процесс ISH.
16. В списке проб выберите *LSI HER2/CEP17 Dual Probe – 30 Test. На вкладке «Протоколы»
(Protocols) по умолчанию будет значиться правильный протокол окрашивания (*FISH
Protocol A ), протокол HIER (*HIER 25 min with ER1 (97)), протокол EIER (*Enzyme 5 for 25 min),
денатурирование (*D10) и гибридизация (*ISH Hybridization (12Hr)).
17. Повторяйте шаги 10–16, пока не будут созданы исследуемые предметные стекла
пациента и средства контроля (контрольные предметные стекла Leica HER2
FISH и/или внутрилабораторные средства контроля). Распечатайте наклейки для
предметных стекол.
18. Наклейте наклейки на предметные стекла .
19. Откройте крышки всех емкостей Leica HER2 FISH System - 30 Test и загрузите
лоток с реактивом в систему Leica BOND-MAX и BOND-III.
20. На каждое предметное стекло положите новые Covertiles.
21. Загрузите контейнер с предметными стеклами в систему Leica BOND-MAX и
BOND-III и нажмите кнопку Load/Unload (Загрузка/разгрузка).
22. Убедитесь, что предметные стекла просканированы и щелкните на кнопке Run (Play)
(Серия) в окне System status (Состояние системы), чтобы немедленно начать окрашивание
(для Leica HER2 FISH System - 30 Test рекомендуется проводить этот анализ в
течение ночи с использованием функции отложенного запуска).
23. Убедитесь, что в поле индикатора контейнера отображается Proc (OK), номер партии
и время завершения.
24. По окончании серии нажмите кнопку Load/Unload (Загрузка/разгрузка)и выньте контейнер
с предметными стеклами из Leica BOND-MAX система и BOND-III системы.
25. Снимите Covertiles и промойте предметные стекла в деионизированной воде.
26. Быстро обезвожьте двумя сменами спирта, просушите воздухом.
27. Нанесите 20 µl DAPI прямо на образец.
28. Положите покровное стекло и дайте раствору полностью распределиться, удалите
все пузырьки воздуха.
29. Обмажьте края покровного стекла лаком для ногтей или аналогичным герметиком.
30. Положите предметные стекла в темное место, чтобы обеспечить формирование
сигнала перед просмотром под флуоресцентным микроскопом.
31. Для сохранения интенсивности сигнала храните окрашенные предметные стекла при –20 °C.
G. Хранение предметных стекол
Храните окрашенные предметные стекла при –20 °C в темном месте. Разрешить
слайды до комнатной температуры до просмотра после извлечения из –20 °C.