Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Инструкция (Страница 7)

Стр. 7 из 24
Pу
сский
Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Инструкции по использованию TA9217 RU-CE-Rev_D 11/11/2013
Pу
сский
C. Методология
• Перед применением этой методологии пользователи должны быть должным образом
обучены технологии автоматизированной флуоресцентной гибридизации in situ.
• Каждая секция ткани, окрашенная с помощью LSI HER2/CEP17 Dual Probe,
позволяет провести одинаковый клеточный анализ и HER2, и сигналов
кинетохорной области 17-й хромосомы. Последующее отношение HER2 к сигналам
17-й хромосомы позволит присвоить образцу количественное значение, показывая
отрицательный (без усиления) или положительный (с усилением) результат.
Неопределенные (пограничные) результаты (1.8–2.2) следует интерпретировать с
осторожностью. Добавьте еще 20 ядер и пересчитайте коэффициент.
D. Предварительная обработка энзимов BOND
Перед окрашиванием разбавьте имеющийся Leica BOND Enzyme Concentrate
2 в соотношении 1:300 с использованием Leica BOND Enzyme Diluent в одной
из прилагаемых открытых емкостей Leica BOND. Например, для окрашивания
10 предметных стекол подготовьте 3 mL рабочего энзимного раствора, разбавив
10 µl Leica BOND Enzyme Concentrate 2 в 2990 µl Leica BOND Enzyme Diluent.
Рекомендуется готовить энзимный раствор непосредственно перед каждой серией
окрашивания и использовать не менее 900 µl на каждое окрашивание.
E. Протокол окрашивания по умолчанию
Рекомендуется использовать Leica HER2 FISH System - 30 Test с рекомендуемым
протоколом окрашивания по умолчанию, см. Таблицу 2 внизу.
Тип протокола Название протокола
Окрашивание *FISH Protocol A
Подготовка *Dewax (Депарафинизация)
HIER *HIER 25 мин с ER1 (97)
Энзим *Enzyme 5 for 25 min
Денатурирование *D10
Гибридизация *ISH Hybridization (12Hr)
Taблица 2: Протокол окрашивания по умолчанию Leica HER2 FISH - 30 Test Staining Protocol
F. Этапы процедуры
Данные инструкции необходимо изучать вместе с Руководством по системе Leica
BOND-MAX система и BOND-III системы. С каждым предметным стеклом следует
использовать новый Leica BOND Universal Covertile ТМ .
Применение Leica BOND Universal Covertile TM , ранее использовавшихся для
иммуногистохимического или гибридизационного окрашивания in situ, по результатам
этого исследования не прошло валидацию.
1. На системе Leica BOND-MAX система и BOND-III системы проверьте, достаточно
ли вместительны емкости для сыпучих и опасных отходов для выполнения
необходимых серий окрашивания.
2. Убедитесь в наличии подходящего спирта, дистиллированной или
деионизированной воды, Leica BOND Dewax Solution, Leica BOND Epitope Retrieval
Solution 1 и Leica BOND Wash Solution в емкостях для реактивов для выполнения
окрашивания.
3. Убедитесь, что установлена чистая Leica BOND Mixing Station.
4. Включите систему Leica BOND-MAX система и BOND-III системы.
5. Включите ПК, подключенный к Leica BOND-MAX система и BOND-III системы.
6. Откройте программу Leica BOND программное обеспечение.